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　　為什么要做ELISA預(yù)實(shí)驗?本生帶您了解

　　做ELISA預(yù)實(shí)驗的?核心目的是提前優(yōu)化條件、規(guī)避風(fēng)險，以小成本保證正式實(shí)驗結(jié)果可靠，避免大批量樣本與試劑的浪費(fèi)?，是正式實(shí)驗前的準(zhǔn)備環(huán)節(jié)，具體原因如下，可參考：

　　一、目的與檢測

　　1. 確定合適的實(shí)驗參數(shù)

　　ELISA實(shí)驗受多個變量影響(抗體稀釋倍數(shù)、包被濃度、孵育溫度、顯色時間等)，即便是商品化試劑盒，不同批次、不同樣本類型的最適條件也存在差異。預(yù)實(shí)驗可以通過小規(guī)模測試確定最佳參數(shù)，保證信號在線性范圍內(nèi)，避免正式實(shí)驗出現(xiàn)信號飽和或靈敏度不足的問題。

　　2. 匹配樣本

　　試劑盒出廠一般僅驗證常見的血清/血漿樣本，對于組織勻漿、細(xì)胞、尿液等特殊樣本，或者疾病狀態(tài)下靶標(biāo)物表達(dá)量異常的樣本，無法提前預(yù)設(shè)稀釋倍數(shù)。預(yù)實(shí)驗可以通過梯度稀釋預(yù)估樣本中靶標(biāo)物的濃度范圍，確定適合的稀釋倍數(shù)，避免樣本濃度超出試劑盒檢測范圍導(dǎo)致結(jié)果失真。同時還能提前發(fā)現(xiàn)樣本中血脂、血紅蛋白等干擾因子，及時做預(yù)處理調(diào)整。

　　3. 提前驗證實(shí)驗可行性

　　預(yù)實(shí)驗可以提前檢驗試劑盒適配性、實(shí)驗設(shè)計合理性，如果結(jié)果不理想可以及時調(diào)整實(shí)驗方案，避免正式實(shí)驗時才發(fā)現(xiàn)問題，導(dǎo)致大量珍貴樣本、昂貴試劑浪費(fèi)，節(jié)省整體實(shí)驗時間與成本。對于第一次操作ELISA的實(shí)驗人員，預(yù)實(shí)驗還可以幫助熟悉整個操作流程，避免因不熟悉操作細(xì)節(jié)導(dǎo)致正式實(shí)驗出錯。

　　4. 保障實(shí)驗結(jié)果可靠性

　　預(yù)實(shí)驗可以驗證當(dāng)前批次試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線是否符合要求(一般要求相關(guān)系數(shù)R2≥0.99)，同時檢查移液操作、洗板效果等流程的穩(wěn)定性，提前建立合適的操作標(biāo)準(zhǔn)，保證最終結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，滿足科研、臨床檢測對數(shù)據(jù)可靠性的要求。

　　二、ELISA預(yù)實(shí)驗的常規(guī)步驟

　　樣本選擇?：從各組正式樣本中隨機(jī)選取1-2例代表性樣本，若樣本量有限，建議分別選1例理論上靶標(biāo)物濃度最高和低的樣本即可。

　　梯度稀釋確定稀釋倍數(shù)?：對樣本做梯度稀釋(通常2倍、5倍或10倍梯度)，同時測定標(biāo)準(zhǔn)品，將樣本OD值與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，確定稀釋后樣本OD值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線中間擬合區(qū)域的最佳稀釋倍數(shù)。

　　摸索顯色時間?：加入底物后定時觀察顯色情況，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度顏色變化時即可終止，以此確定適合本實(shí)驗體系的顯色時間。

　　總結(jié)調(diào)整?：根據(jù)預(yù)實(shí)驗結(jié)果總結(jié)操作問題，調(diào)整實(shí)驗參數(shù)后，再開展正式大樣本實(shí)驗。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考，具體可咨詢技術(shù)老師!

　　本生BUNSEN一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。